ARL Lawang: laporan uji aktivitas pengawet

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Pengujian mikrobiologis terhadap produk perbekalan farmasi dan makanan yang beredar diseluruh Indonesia sangat perlu dilakukan dengan mengingat bahwa produk tersebut sangat mudah dikontaminasi oleh mikroorganisme.Keberadaan mikroorganisme dalam perbekalan farmasi dan makanan tidak diharapkan, karena berdampak negative terhadap kesehatan para konsumen.Disamping itu juga dalam rangka menghadapi era globalisasi dan ketersediaan semua produk-produk dalam bentuk siap pakai, maka pengontrolan dan pengujian secara mikrobiologik terhadap produk perbekalan farmasi dan makanan mutlak dibutuhkan.

Seiring dengan kemajuan teknologi, manusia terus melakukan perubahan-perubahan dalam hal pengolahan bahan makanan.Hal ini wajar sebab dengan semakin berkembangnya teknologi kehidupan manusia semakin hari semakin sibuk sehingga tidak mempunyai banyak waktu untuk melakukan pengolahan bahan makanan yang hanya mengandalkan bahan mentah yang kemudian diolah di dapur.Dalam keadaan demikian, makanan cepat saji (instan) yang telah diolah di pabrik atau telah diawetkan banyak manfaatnya bagi masyarakat itu sendiri. Permasalahan atau pertanyaan yang timbul kemudian adalah apakah proses pengawetan, bahan pengawet yang ditambahkan atau produk pangan yang dihasilkan aman untuk dikonsumsi manusia?

Keamanan produk terutama pada makanan, kosmetik, sediaan obat atau obat tradisional merupakan suatu tuntutan yang telah dikemukakan sejak munculnya gangguan kesehatan manusia akibat adanya cemaran mikroorganisme. Prduk ang tercemar mikroorganisme dapat memproduksi racun yang dapat menyebabkan timbulnya suartu penyakit.

Suatu sediaan dikatakan rusak bila terjadi perubahan warna, perubahan bentuk (pecah, terdapat kristal, lembap), perubahan rasa, perubahan bau, dan penguraian.

Maka untuk menghindari dan mengurangi kemungkinan pencemaran suatu produk oleh mikroorganisme, dilakukan proses pengawetan produk.

Penggunaan pengawet dalam suatu sediaan harus tepat, baik jenis maupun dosisnya. Suatu bahan pengawet mungkin efektif untuk mengawetkan suatu produk tertentu, tetapi tidak efektif untuk mengawetkan produk lainnya karena suatu produk mempunyai sifat yang berbeda-beda sehingga mikroba perusak yang akan dihambat pertumbuhannya juga berbeda. Beberapa bahan pengawet yang umum digunakan adalah metil paraben, propil paraben, asam benzoat, dan natrium benzoat.

B. Rumusan Masalah

Adapun rumusan masalah dalam praktikum ini adalah apakah pengawet yang digunakan memiliki pengaruh yang besar terhadap banyaknya zona bakteri yang dimilikinya?

C. Maksud Praktikum

Adapun maksud praktikum ini yaitu untuk mengetahui dan memahami cara pengujian aktivitas bahan pengawet dari sediaan farmasi, dengan melibatkan tingkat konsentrasi dan jenis bakteri yang digunakan.

D. Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk menentukan daerah zona hambat dari suatu pengawet, menentukan jumlah koloni bakteri dari daerah zona hambat dengan variasi konsentrasi yang digunakan.

E. Manfaat Praktikum

Manfaat praktikum ini adalah agar mahasiswa dapat mengetahui metode pengujian aktivias bahan pengawet terhadap sediaan bahan farmasi dan manfaatnya dalam kehidupan sehari-hari.

BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. Teori Umum

Bahan pangan atau makanan disebut rusak atau tidak layak dimakan jika sifat-sifat bahan pangan atau makanan tersebut telah berubah. Kerusakan pangan dapat disebabkan oleh berbagai faktor, antara lain adanya pertumbuhan dan aktivitas mikroorganisme, kerusakan karena serangga atau binatang pengerat, adanya aktivitas enzim dan non enzim dalam bahan makanan, dan adanya kerusakan fisik, misalnya karena proses pembekuan, pengeringan, pemanasan, dan tekanan (Maksum. 2011).

Gejala keracunan sering terjadi ketika seseorang mengkonsumsi makanan yang mengandung bahan-bahan berbahaya, termasuk mikroorganisme, yang tidak dapat terdeteksi langsung dengan indera manusia.Bahan-bahan kimia berbahaya yang terdapat dalam makanan sulit diketahui secara langsung sehingga sering menyebabkan keracunan makanan (Maksum. 2011).

Mikroorganisme berbahaya yang terdapat dalam makanan kadang-kadang dapat dideteksi jika pertumbuhan mikroorganisme tersebut menyebabkan pertumbuhan mikroorganisme tersebut menyebabkan perubahan tertentu pada makanan, misalnya menimbulkan bau asam, bau busuk, dan lain-lain.Akan tetapi, tidak semua mikroorganisme menimbulkan perubahan yang mudah diketahui sehingga sering menimbulkan masalah jika kita mengkonsumsi makanan tersebut (Maksum. 2011).

Pada prinsipnya, upaya pengawetan bahan makanan didasarkan pada (Maksum. 2011) :

(a) pencegahan atau penghilangan kontaminasi mikroorganisme.

(b) penghambat pertumbuhan dan metabolisme organism.

Pemilihan metode pengawetan makanan harus memperhatikan jenis spora bakteri yang tahan terhadap pemanasan yang kemungkinan terdapat dalam bahan makanan tersebut. (Maksum. 2011).

Penanganan bahan makanan secara aseptis sangat penting dilakukan agar makanan tidak tercemar serta mengurangi kerusakan makanan dan memperkecil kemungkinan kontaminasi oleh bakteri patogen (Maksum. 2011).

Pengepakan, pengemasan, dan pengalengan makanan yang telah diolah harus memenuhi cara produksi makanan yang baik agar makanan terhindar dari mikroorganisme yang dapat merusak makanan(Maksum. 2011).

Untuk menghindari dan mengurangi kemungkinan pencemaran suatu produk oleh mikroorganisme, dilakukan proses pengawetan produk. Secara garis besar tehnik pengawetan dapat dibagi dalam tiga golongan yaitu pengawetan secara alami, pengawetan secara biologis dan pengawetan secara kimia.Syarat zat pengawet adalah mampu membunuh kontaminan mikroorganisme, tidak toksik atau menyebabkan iritasi pada pengguna, stabil dan aktif, serta selektif dan tidak bereaksi dengan bahan (Sylvia. 2008).

Tehnik pengawetan produk (Sylvia. 2008) :

a. Proses pengawetan secara alami

meliputi proses pemanasan dan pendinginan. Teknik liofilisasi atau teknik pengeringan beku merupakan teknik preservasi (pengawetan) yang sangat terkenal dan biasa digunakan untuk mikroorganisme dengan kisaran yang luas.Penerapan teknik tersebut diperkenalkan oleh Perlman dan kikuchi (1977) dan Heckly (1978). Teknik ini termasuk pengawetan secara alami denga cara pembekuan kultur yang diikuti dengan pengeringan dalam keadaan vakum untuk menghasilkan sublimasi air sel. Teknik ini melibatkan pertumbuhan kultur ke fase sel stasioner yang maksimal dan meresuspensi sel dalam media seperti susu, serum, atau natrium glutamat. Beberapa tetes suspensi ditransfer ke dalam ampul, kemudian dibekukan dan divakumkan sampai terjadi sublimasi sempurna, dan ampul ditutup.Ampul disimpan dalam pendingin dan dapat bertahan hidup selama 10 tahun atau lebih.

b. Pengawetan secara Biologis

Proses pengawetan secara biologis dapat dilakukan dengan fermentasi (peragian), yaitu proses perubahan karbohidrat menjadi alkohol. Zat –zat yang bekerja pada proses ini adalah enzim yang dibuat oleh sel-sel ragi. Lamanya proses peragian tergantung pada bahan yang akan diragikan.

c. Pengawetan secara Kimia

pada proses pengawetan secara kimia, digunakan bahan-bahan kimia yang bersifat dapat mencegah pertumbuhan mikroorganisme. Sebagai contoh adalah penggunaan gula pasir, garam dapur, nitrat, nitrit, natrium benzoat, asam propionat, asam sitrat, garam sulfat, dan lain-lain. Proses pengasapan juga termasuk cara kimia, sebab bahan-bahan kimia dalam asap dimasukkan kedalam bahan makanan yang akan diawetkan.

Pengawetan dengan cara dehidrasi. Dehidrasi dapat digunakan untuk menngawetkan bahan makanan terutama karena menghambat pertumbuhan; mikroorganismenya sendiri tidak selalu terbunuh. Pertumbuhan mikroorganisme dapat dicegah dengan cara mengurangi kelembapan lingkungannya sampai dibawah titik kritis. Titik kritis ditentukan oleh ciri-ciri organisme yang bersangkutan dan oleh kepastian bahan makanan untuk mengikat air sehingga tidak tersedia sebagai kelembapan bebas yang dapat ditiadakan oleh proses dehidrasi (Pelcaar. 2009).

Walaupun khamir dan kapang relatif resisten terhadap perubahan osmotik, tetapi proses-proses pengawetan pangan yang didasarkan pada prinsip ini bagaimanapun juga sangat bermanfaat. Jeli dan selai jarang diganggu oleh kegiatan bakteri karena kadar gulanya tinggi. Namun, seringkali dijumpai juga pertumbuha kapang pada permukaan jeli yang terbuka ke udara. Hasil yang sama kita peroleh bila mengawetkan daging dan bahan makanan lain dalam larutan garam. Tekanan osmotik yang tinggi dapat menghambat pertumbuhan mikroba, tetapi tidak dapat diandalkan untuk mematikan organisme (Irianto. 2006).

Hanya beberapa macam zat kimia secara hukum diterima untuk digunakan dalam pengawetan makanan.Diantaranya yang paling efektif ialah asam benzoat, sorbat, asetat, laktat dan propionat, kesemuanya ini adalah asam organik.Asam sorbat dan propionat digunakan untuk menghambat pertumbuhan kapang pada roti.Nitrat dan nitrit, yang dipergunakan untuk mengawetkan daging (terutama untuk mengawetkan warna) bersifat menghambat pertumbuhan beberapa bakteri anaerobik, terutama Clostridium botulinum.Kemungkinan nitrit bersifat karsinogenik ( mengakibatkan penyakit kanker) bagi manusia menimbulkan keragu-raguan mengenai kelangsungan penggunaanya (Irianto. 2006).

Pengawetan dengan cara meningkatkan tekanan osmotik. Air akan ditarik keluar dari sel mikroorganisme bila sel tersebut dimasukkan kedalam larutan yang mengandung sejumlah besar substansi terlarut seperti gula atau garam. Dengan perkataan lain, sel tersebut mengalami dehidrasi, metabolisme terhenti, dan dengan demikian memperlambat atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme(Pelcaar. 2009).

Setiap zat antimikroba dapat bersifat pengawet, meskipun demikian semua zat antimikroba adalah zat yang beracun. Untuk melindungi konsumen secara maksimum, pada penggunaan harus di usahakan agar pada kemasan akhir kadar pengawet yang masih efektif lebih rendah dari kadar yang dapat menimbulkan keracuna pada manusia (Ditjen POM. 1995).

Pengujian berikut dimaksudkan untuk menunjukkan efektifitas pengawet antimikroba yang ditambahkan pada sediaan dosis ganda yang dibuat dengan dasar atau bahan pembawa berair seperti produk-produk parenteral, telinga, hidung dan mata, yang dicantumkan pada etiket produk bersangkutan.Pengujian dan persyaratan hanya berlaku pada produk di dalam wadah asli belum dibuka yang didistribusikan oleh produsen (Ditjen POM. 1995).

B. Uraian Bahan

1. Air suling (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Aqua Destillata.

Nama lain : Air suling/aquadest.

RM/BM : H₂O / 18,02.

Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, dan tidak mempunyai rasa.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

Kegunaan : Sebagai pelarut.

2. Agar (Dirjen POM, 1979)

Nama resmi : Agar

Sinonim : Agar-Agar

Pemerian : Berkas potongan memanjang, berlekatan atau berbentuk keping, serpih atau butiran, jingga lemah kekuningan sampai kuning pucat atau berwarna, tidak berbau atau lemah, rasa berlendir.

Kelarutan :Praktis tidak larut dalam air , dan larut dalam air mendidih.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

Kegunaan : Sebagai pemadat

3. Pepton (Dirjen POM,1979)

Nama Resmi : Pepton

Sinonim : Pepton Kering

Pemerian : Serbuk; kuning kemerahan sampai coklat; bau khas, tidak busuk.

Kelarutan : Larut dalam air; memberikan larutan berwarna coklat kekuningan yangbereaksi agak asam; praktis tidak larut dalam etanol (95 %) P dan dalam eter P.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

Kegunaan :Sebagai protein

4. Ekstrak Beef (Dirjen POM, 1995)

Nama resmi : Beef extrak

Sinonim : Kaldu nabati dan kaldu hewani.

Pemerian : Berbau dan berasa pada lidah.

Kelarutan : Larut dalam air dingin.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat.

5. Asam Benzoat (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : ACIDUM BENZOICUM

Nama lain : Asam benzoate

RM/ BM : C₇H₆0₂ / 122,12

Pemerian : hablur halus dan ringan; tidak berwarna; tidak berbau

Kelarutan : larut dalam lebih kurang 350 bagian air dalam lebih kurang 3 bagian etanol (95%P), dalam 8 bagian kloroform P dan dalam 3 bagian eter P.

Penyimpanan : dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : sebagai bahan pengawet

6. Metil Paraben (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : METHYLIS PARABENUM

Nama lain : Metil paraben, Nipagin M

RM/ BM : C₈H₈O₃ / 152,15

Pemerian : serbuk hablur halus; putih; hamper tidak berbau; tidak mempunyai rasa; kemudian agak membakar diikuti rasa tebal

Kelarutan :larut dalam 500 bagian air, dalam 20 bagian air mendidih, dalam 3,5 bagian etanol (95%P) dan dalam 3 bagian aseton P; mudah larut dalam eter P dan dalam larutan alkali hidroksida.

Penyimpanan : dalam wadah tertutp baik

Kegunaan : sebagai bahan pengawet

7. Natrium Benzoat (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : NATRII BENZOAS

Nama lain : Natrium benzoate

RM/ BM : C₇H₅NaO₂ / 144,11

Pemerian : butiran atau serbuk hablur; putih; tidak berbau atau hampir tidak berbau

Kelarutan : larut dalam 2 bagian air dan dalam 90 bagian etanol (95%P).

Penyimpanan : dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : sebagai bahan pengawet

8. Propil Paraben (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : PROPYLIS PARABENUM

Nama lain : Propil Paraben / Nipasol

RM/ BM : C₁₀H₁₂O₃ / 180,21

Pemerian : hablur atau serbuk hablur; putih atau kuning gading muda; tidak berbau; rasa pahit

Kelarutan : sangat sukar larut dalam air; agak sukar larut dalam etanol (95%)P; larut dalam larutan alkali hidroksida

Penyimpanan : dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : sebagai bahan pengawet

9. Glukosa (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : GLUCOSUM

Nama lain : Glukosa

RM/ BM : C6H12O6.H2O / 198,17

Pemerian : hablur tidak berwarna, serbuk hablur atau butiran putih; tidak berbau, rasa manis

Kelarutan :mudah larut dalam air, sangat mudah larut dalam air mendidih, agak sukar larut dalam etanol (95%)P mendidih; sukar larut dalam etanol (95%)P.

Penyimpanan :dalam wadah tertutup baik

Khasiat :sebagai desinfektan

C. Bakteri Uji

1. Aspergillus niger

a. Klasifikasi (Garrity,2004)

Domain : Eukaryota

Kerajaan : Fungi

Filum : Ascomycota

Upafilum : Pezizomycotoina

Class : Eurotiomycetes

Ordo : Eurotiales

Familia : Trichomaceae

Genus : Aspergillus

Species : Aspergillus niger

b. Morfologi (wikipedia.org)

Aspergillus niger merupakan fungi dari filum ascomycetes yang berfilamen, mempunyai hifa berseptat, dan dapat ditemukan melimpah di alam. Fungi ini biasanya diisolasi dari tanah, sisa tumbuhan dan udara di dalam ruangan.Koloninya berwarna putih pada PDA 25^oC dan berubah menjadi hitam ketika konidia dibentuk. Kepala konidia dari A. niger berwarna hitam, bult cenderung memisah menjadi bagian-bagian yang lebih longgar seiring dengan bertambahnya umur.

2. Candida albicans

a. Klasifikasi (Garrity, 2004)

Kingdom : Protista

Phylum : Bryophyta

Class : Deuteromycetes

Ordo : Saccharomycetales

Famili : Cryptococcaceae

Genus : Candida

Spesies : Candida albicans

b. Morfologi: (Chairuddin Lakare, 1999)

Pada sediaan mikroskopik eksudat, Candida tampak sebagai ragi lonjong bertunas,gram positf,ukurannya 2-3 x 4-6 m dan sel-sel bertunas,gram positif yang memanjang menyerupai lifa (pseudehifa). Pada agar Saboraud yang dieramkan pada suhu kamar, terbentuk koloni-koloni lunak yang berwarna krim yang mempunyai bau seperti ragi.Pertumbuhan permukaan terdiri darisel-sel yang bertunas yang lonjong.Pertumbuhan yang tertutup terdiri dari pseudomisellium.Ini terdiri dari pseudohifa yang membentuk blastospora pada nodus-nodus dan kadang-kadang khlamidospora dan ujung-ujungnya.Dapat meragikan glukosa dan maltosa, menghasilkan asam dan gas.Menghasilkan asam dari sukrosa dan tidak bereaksi dengan laktosa.

3. Pseudomonas aeruginosa (Yulistrianti, 2006)

a. Klasifikasi

Kingdom : Prokariotik

Divisio : Protophyta

Ordo : Pseumonadales

Sub Ordo : Pseumonnadineae

Family : Psedomonadaceae

Genus : Psedoumonas

Species : Psedoumonas aeroginosa

b. Morfologi

Bentuk batang bulat 0,5 – 1,5 mili mikron, ciri petumbuhan pada agar sel putih, dan sel tampak sendiri dan berpasangan, divisi lebih dari satu dan berkelompok mengemnbang sampai tak beraturan.

4. Staphylococcus aureus (Garity, 2004)

a.Klasifikasi

Domain : Bacteria

Phylum : Firmicutes

Class : Bacilli

Ordo : Eubacteriales

Familia : Micrococcaceae

Genus : Staphylococcus

Spesies : Staphylococcus aureus

b. Morfologi

Termasuk bakteri gram negatif, tidak berspora banyaknya besarnya bervariasi, bergerak dengan flagel peritlin tumbuh dengan cepat pada pembenihan biasa tetapi tidak merugikan laktosa / sukrosa. Merupakan asam dan beberapa gas dari glukosa dan maltosa. Cenderung menghasilkan hydrogen sulfida, dapat hidup dalam air yang dibekukan. Untuk masa yang lama, resisten terhadap zat kimia tertentu seperti hijau brilliant Na - tetrationat, Na Dioksikholat, menghambat kuman koliform dan bermanfaat untuk mengisolasi.

D. Prosedur Praktikum (Ditjen POM,1995)

1. Mikroba Uji

Gunakan biakan mikroba berikut:Candida albicans (ATCC No.0231), Aspergillus niger (ATCC No.8739),Pseudomonas aeurogenosa (ATCC No.9027) dan Staphylococcus aureus (ATCC No.6538). selain mikroba yang disebut di atas dapat digunakan mikoba lain sebagai tambahan terutamajika dianggap mikroba bersangkutan dapat merupakan kontaminan selamapenggunaan sediaan tersebut.

2. Media

Untuk biakan awalmikroba uji, pili media agar yang sesuai untuk pertumbuhan yang subur mikroba uji, seperti Soybean-Casein Digest Agar Media yang tertera pada Uji Batas Mikroba.

3. Prosedur

Jika wadah sediaan dapat ditrembus secara aseptikmengunakan jarum suntik melalui sumbat karet, lkukan pengujian pada lima wadah asli sediaan. Jika wadah sediaan tidak dapat ditembus secara aseptis, pindahkan 20 ml sampel ke dalam masing-masing tabung bakteriologik bertutup, berukuran sesuai dan steril. Inokulasi masing-masing wadah atau tabung dengan salah satu suspensi mikroba baku, menggunnakan perbandingan 0,10 ml inokula setara dengan 20 ml sediaan, dan campur. Mikroba uji dengan jumlah yang sesuai harus ditambahkn sedemikian rupa hingga jumlah mikroba di dalam sediaan uji segera setelah inokulasi adalah antara 100.000 dan 1.000.000 per ml. Tetapkan jumlah mikroba viabel di dalam tiap suspensi inokula, dan hitung angka awal mkroba tiap ml sediaan yang diuji dengan metode lempeng. Inkubasi wadah atau tabung yang telah diinokulasi pada suhu 20^o sampai 25^o. Amati wadah atau tabung pada hari ke-7, ke-14, ke-21 dan ke-28 sesudah inokulasi, catat tiap perubahan yang terlihat dan tetapkan jumlah mikroba viabel pada tiap selang waktu tersebut dengan metode lempeng. Dengan menggunakan bilangan teoritis mikroba pada awal pengujian, hitung perubahan kadar dalam persentipmikroba selama pengujian.

4. Penafsiran Hasil suatu Pengawet

Penafsiran hasil suatu pengawet dinyatakan efektif di dalam contoh yang di uji, jika :

a. Jumlah bakteri viabel pda ari ke 14berkurang hingga tidak lebih dari 0,1% dari jumlah awal.

b. Jumlah kapang dan khamir viabel selama 14 hari pertama adalah tetap atau kurang darijumlah awal.

c. Jumlah tiap mikroba uji selamahari tersisa dari 28 haripengujian adalah tetapatau kurang dari bilangan yang disebut pada a dan b.

BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

A. Alat yang Dipakai

Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah autoklaf, batang pengaduk, botol pengencer, cawan Petri, erlenmeyer, gelas ukur, gelas kimia, inkubator, lampu spiritus, ose bulat, penggaris, pinset, sendok tanduk besi, spoit 1 ml, 5 ml dan 10 ml, timbangan analitik, dan vial

B. Bahan yang Digunakan

Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalahair suling, asam benzoate, Aspergillus niger (AN) agar, Candida albicans (CA) ekstrak beef, glukosa kertas label, kapas, kertas, kertas saring, metil paraben, natrium benzoate, pepton, propil paraben, Pseudomonas aeruginosa (PA), Staphylococcus aureus (SA).

C. Cara Kerja

1. Penyiapan Sampel

Disiapkan 4 jenis pengawet masing-masing metal paraben, natrium benzoate, propel paraben dan asam benzoate. Ditimbang masing-masing untuk dibuat konsentrasi 0,1% dan 0,2%. Dilarutkan masing-masing pengawet ke dalam pelarut yang sesuai. Dimasukkan ke dalam vial dengan konsentrasi yang berbeda-beda untuk masing-masing pengawet.

2. Penyiapan Bakteri Uji

a. Peremajaan mikroba uji

Disiapkan alat dan bahan, diambil 1 ose dari biakan murni mikroba uji Aspergillus niger kemudian diinokulasikan pada medium NA miring kemudian diinkubasikan selama 24 jam pada suhu 37^oC untuk bakteri.

b. Pembuatan suspensi mikroba uji

Mikroba hasil peremajaan , masing-masing disuspensikan dengan larutan NaCl 0,9% steril kemudian diukur transmitans menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 580 nm pada 25% T untuk bakteri, sebagai blanko digunakan larutan NaCl 0,9% steril.

3. Pengujian Aktivitas Pengawet

a. Untuk konsentrasi 0,1%

Dimasukkan 9 ml medium PDA (Potato Dextrosa Agar)ke dalam vial kemudian ditambahkan 1 ml pengawet konsentrasi 0,1% yang digunakan (metil paraben, propel paraben, asam benzoate, natrium benzoate) lalu ditambahkan 0,02 ml suspense bakteri Aspergillus niger dan dihomogonken. Dimasukkan ke dalam cawan petri yang telah diberi label masing-masing pengawet dan dibiarkan hingga memadat. Setelah memadat dimasukkan cawan petri ke dalam enkas selama 3x24 jam. Dilakukan pengamatan pada hari ke-0, 7, 14 dan 28.

b. Untuk konsentrasi 0,2%

BAB IV

KAJIAN HASIL PRAKTIKUM

A. Hasil Pengamatan

1. Tabel Pengamatan


KELOMPOK	PENGAWET	MIKROBA UJI	[ ]	JUMLAH KOLONI MIKROBA UJI
				HARI KE-
				1	7	14	28
I	Propil paraben	CA	0.10%	-	-	3	-
	Propil paraben	CA	0.20%	-	-	20	-
	Propil paraben	EC	0.10%	-	-	-	-
	Propil paraben	EC	0.20%	33	-	-	-
II	As. Benzoat	AN	0.10%
	As. Benzoat	AN	0.20%	-	7	8	-
	As. Benzoat	SA	0.10%	-	-	-	-
	As. Benzoat	SA	0.20%	-	7	13	-
III	Na. Benzoat	PA	0.10%	8	17	18	-
	Na. Benzoat	PA	0.20%	6	-	-	-
	Na. Benzoat	AN	0.10%	5	8	-	-
	Na. Benzoat	AN	0.20%	7	9	-	-
IV	Metil paraben	CA	0.10%	-	-	-	-
	Metil paraben	CA	0.20%	-	-	-	-
	Metil paraben	PA	0.10%	-	62	-	-
	Metil paraben	PA	0.20%	-	83	-	-

BAB V

Pembahasan

Pengawet antimikroorganisme adalah zat yang ditambahkan pada sediaan obat untuk melindungi sediaan tersebut terhadap kontaminasi mikroorganisme.Adapun maksud praktikum ini yaitu untuk mengetahui dan memahami cara pengujian aktivitas bahan pengawet dari sediaan farmasi, dengan melibatkan tingkat konsentrasi dan jenis bakteri yang digunakan. Sedangkan tujuan dari praktikum ini adalah untuk menentukan daerah zona hambat dari suatu pengawet, menentukan jumlah koloni bakteri dari daerah zona hambat dengan variasi konsentrasi yang digunakan.

Mekanisme kerja bahan pengawet untuk merusak mikroorganisme adalah terhadap toksisitas primernya artinya diarahkan kembali pada kerja racun sel, yang mengembangkan pada dinding sel atau bagian-bagian sel lainnya. Tergantung dari konsentrasi bahan pengawet yang terdapat dalam sediaan obat, maka aksinya dapat dibedakan atas :

a. Pada konsentrasi yang sangat rendah terjadi suatu penimbunan pada membran sitoplasma, yang mengarahkan pada suatu perkoasilitas yang meninggi dari rentang sitoplasma, tanpa mengganggu atau merusak sel.

b. Pada konsentrasi mikrobiotik, artinya pada konsentrasi yang menyebabkan suatu pemblokiran pertumbuhan, perubahan membran, bersifat toksis. Hal tersebut disebabkan karena terjadi akumulasi bahan pengawet dalam membran sitoplasma dan kadang-kadang juga dalam bagian sel.

c. Pada konsentrasi mikrobisid, artinya pada konsentrasi yang menyebabkan kematian sel hal ini disebabkan karena tingginya kadar bahan pengawet tersebut didesak masuk ke dalam bagian sel yang lebih dalam, sehingga dapat menyebabkan terjadinya proses desemulsifikasi, koagulasi, persipitasi dan dalam keadaan ekstern mengarah kepada otolisa yaitu mengalirnya keluar komponen intraseluer.

Suatu bahan pengawet diharapkan mempunyai sifat-sifat sebagai berikut :

a. Tersatukan secara fisiologis, pada konsentrasi yang dipakai tidak boleh muncul sikap toksis, alergi atau sensibilitasi

b. Tersatukan dengan aktif dan bahan pembantu

c. Stabilitas kimia, dikehendaki suatu stabil panas tertentu

d. Bau dan rasa, trutama pada pemakaian per oral sebaiknya tidak berbau dan berasa.

e. Spektrum kerja, pada konsentrasi yang diinginkan tetap bersifat bakteriosida, bakteriostatika. Fungisida, fungistatika. Aktivitas tersebut sebaiknya muncul dengan singkat.

Untuk alasan yang paling mendasar mengenai pemakaian konsentrasi yang berbeda pada tiap-tiap sampel bahan pengawet yakni untuk membandingkan jumlah atau banyaknya koloni bakteri yang muncul pada pengamatan selama 1 bulan tersebut. Dimana juga bergantung pada jenis pengawet yang digunakan.

Pengamatan dilakukan selama sekali dalam seminggu, sebab batas waktu pertumbuhan mikroorganisme atau bakteri koloni membutuhkan waktu yang agak lama untuk terus menerus berkembang dalam suatu habitatnya. Sehingga penampakan bakteri koloni yang nantinya akan diamati jumlahnya bisa mencapai batas yang tak terhingga (∞).

Untuk kelompok III, dengan menggunakan bahan pengawet metil paraben dengan tingkat konsentrasi 0,1% dan 0,2%. Pada pseudomonas Aurelius konsentrasi 0,1% jumlah koloni yang nampak muncul pada hari ke-1 dengan jumlah 8, hari ke-7 dengan jumlah koloni 17, pada hari ke 14 jumlah 18 dan hari ke-28 dengan jumlah koloni TBUD. Sedangkan untuk konsentrasi 0,2% jumlah koloni yang nampak muncul pada hari ke-1 dengan jumlah 6, pada hari ke 7 sampai hari ke-28 adalah TBUD. Sedangkan untuk bakteri uji Asperigilus nigger untuk konsentrasi 0,1% jumlah koloni yang nampak muncul pada hari ke-1 dengan jumlah 5, lalu pada hari ke 7 dengan jumlah 8, sedangkan pada hari ke 14 dan hari ke-28 dengan jumlah koloni TBUD. Sedangkan untuk konsentrasi 0,2% jumlah koloni yang nampak muncul pada hari kesampai hari ke-.1 adalah 7, dan hari ke 7 dengan jumlah 9 kolonisedangkan pada hari ke 14 dan hari ke-28 adalah TBUD.

BAB V

PENUTUPDAN KESIMPULAN

A. Kesimpulan

Kesimpulan yang dapat ditarik dari hasil praktikum ini adalah :

1. Pengawet yang memiliki efektifitas yang lebih baik dalam menghambat pertumbuhan mikroorganisme adalah propil paraben, terlihat dari sedikit jumlah koloni yang tampak pada medium.

2. Perbedaan konsentrasi pengawet mempengaruhi keefektifitas dari pengawet tersebut, dimana konsentrasi 0,01% lebih menghambat mikroorganisme dibandingkan konsentrasi 0,02%.

3. Pada hari ke-28 diperoleh hasil koloni TBUD untuk semua pengawet.

B. Saran

Sebaiknya setelah selesai praktikum asisten memberikan penjelasan mengenai laporan(apa-apa saja yang perlu dimasukkan) sehingga mempermudah praktikan dalam pembuatan laporan.

DAFTAR PUSTAKA

Burchanan, Egibbobins. 1974. Determinatif Bakteriologi. The Williams and Wilkins Company.

Ditjen POM. 1979. Farmakope Indonesia edisi III. Depkes RI; Jakarta.

Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia edisi IV. Depkes RI; Jakarta.

Garrity M. George, 2004. Taxonomic Autline of the Prokaryetos Bergey`s Manual Systemic Bacteriology. Second edition.

Irianto, Koes. 2006. “Mikrobiologi, Jilid I”. Yrama Widya. Bandung.

Pelcaar, Michael.2009. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Penerbit Universitas Indonesia.

Pratiwi, Sylvia T. 2008. “Mikrobiologi Farmasi”. Erlangga. Jakarta.

Radji, Maksum. 2002.Buku Ajar Mikrobiologi. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta